临床分子诊断技术由PCR到NGS，为临床医师和受检者提供了更多选择。根据临床诊断和检测需求选择合适的检测平台，将有助于减少检测费用，以及更快地获得基因检测结果。临床常用基因检测技术平台的特点以及适用项目，下文为您一一介绍。
# 实时荧光定量PCR
即qPCR（quantitative real-time PCR）
基本原理
在PCR反应过程中，每经过一个循环，PCR产物量增加，相应的荧光信号强度也跟着增加，此时收集一个荧光强度信号。经过若干个循环后，可以得到一条以循环数(cycle threshold,CT)为横坐标和荧光强度(△Rn)变化为纵坐标的“S”形荧光扩增曲线。
优势
检测周期短，费用较低。
不足
通量较低（检测位点数少），部分疾病类型无法检测。
常用检测项目
肿瘤驱动基因检测（EGFR、EML4-ALK、ROS1、KRAS、NRAS、BRAF）。
# 一代测序
经典的Sanger测序技术，也是测序界金标准
基本原理
核酸模板在核酸聚合酶、引物、四种单脱氧核苷酸存在条件下复制或转录时，如果在四管反应系统中分别按比例引入四种双脱氧核苷酸，只要双脱氧核苷酸掺入链端，该链就停止延长，链端掺入单脱氧核苷酸的片段可继续延长。如此每管反应体系中便合成以共同引物为5'端，以双脱氧核苷酸为3'端的一系列长度不等的核酸片段。反应终止后，分四个泳道进行电泳，以分离长短不一的核酸片段(长度相邻者仅差一个核苷酸)，根据片段3'端的双脱氧核苷酸，便可依次阅读合成片段的核苷酸排列顺序。
优势
检测周期较短，单次检测费用较低，准确率高，通量适中（可一次性完成多个疾病高发位点的检测）。
不足
不适用于较多（超过100）位点项目的检测。
常用检测项目
心脑血管项目用药（如华法林、氯吡格雷、降压降脂药物）指导、NGS检出位点的验证（有突变频率要求）。
# 二代测序
NGS（Next Generation Sequencing），也称下一代测序技术
基本原理（以Illumina测序平台为例）
基于边合成边测序技术（Sequencing-By-Synthesis，SBS）的新型测序技术，通过单分子阵列实现在小型芯片（FlowCell）上进行桥式PCR反应，然后使用可逆阻断技术实现每次只合成一个碱基，再利用相应的激光激发荧光基团，捕获激发光，从而读取碱基信息。
优势
通量高（可一次性完成200以上位点的检测），准确性较高。
不足
流程较复杂导致检测周期较长，费用相对较高。
常用检测项目
WES、转录组、肿瘤靶向用药、化疗药物指导、肿瘤预后监测以及肿瘤遗传风险评估。
总 结
不同基因检测技术平台由于其检测原理不同，在临床应用上具有不同的适用范围，通过结合临床诊断结果和检测需求选择合适的检测项目及检测平台，可以更好为临床提供高效满意的基因检测服务。
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